介    绍

     实验数据完成了，如何绘制为柱状图？

本文以实时荧光定量PCR(qPCR)为例讲解。

qPCR是通过荧光信号对扩增进程实时检测，由于其灵敏度高、特异性强，样本的Ct值和与基因拷贝数有关，现已作为科研实验中重要的验证方法。

今天，辣鸡小编教大家从数据处理到图形绘制的全部过程，你可要记好哦~

我可要打广告了，被投诉文章就会删掉。

软    件

软件：Excel学生版 和 GraphPad Prism；本文使用的是GraphPad Prism7

使用瞎编数据，for example：与对照(CG)相比，线虫liver处理的X基因的相对表达量，数据前处理得出相对表达量，然后用graphpad进行绘图。

1、从仪器中导出的qPCR数据，从数据中找到result。(7500仪器)

2、由于导出的数据，是根据孔板的序列排的，需要对选基因列进行排序筛选，计算数据。将对照组与实验组分别复制。方便计算，不要在原始数据基础上进行计算 。保留好原始数据。对差异过大的值，可以进行剔除。

比如说(15.1，15.2，25.2)，虽然没有依据25.2是错误的数据，，，但是我就是想剔除。。。

具体排序，具体看第3点

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3、分别计算4次(或3次)生物学重复的平均值，按照如下图中的公式计算

第一步：△Ct=(目的基因的CT-内参基因的CT)，

第二步：△△Ct(实验组的△Ct-对照组的△Ct)，

第三步：2^-△△Ct值(相对表达量，2的负△△Ct，也可以使用函数POWER计算计算)，

【其中Ct值的范围是15-35，这个范围似乎每个实验组的要求不一样，主要看自己】。

数据都是瞎编的。

这里你的出来只有一个值，其实就是GAPDH是默认是 1.

4、相对差异倍数处理好后，打开GraphPadPrism，选择Column，填入Excel中整理好的3次生物学重复实验数据，作图。

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5、点击左侧Data1(第4点4)，出现如下图形样式，可选择你自己喜欢的。

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6、生物学实验要求进行统计学分析，点击上面菜单栏中的Analyze，选择Column analyses中的t tests，选择右侧要比对的2个样本，点击确定，弹出的对话框中就会显示P value和P value summary。

线虫的实验基本上T检验就能解决大部分。

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7、画出表示差异的标识。点击左侧Data1返回柱状图页面，点击菜单栏中的Draw和Write的如下位置，在柱状图上画出——和****(T 打字自己输入** )，某些杂志甚至对图片的字体都做出来了要求。

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8、由于软件直接给出的图不好看。甚至不如黑白，我们可以手动进行设置；鼠标分别双击误差线，柱子，坐标轴，更改误差线的颜色、宽度；*的颜色、大小设置；XY轴和柱状图的颜色、宽度、长度等。(遵循哪里不懂点哪里？？！！)

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双击图片(柱子？，哪里想改点哪里)

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9、最终图形如下(左图)，你也可以改成彩色(右图)。

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10、保存；做好柱状图后，点左侧列表的Data1—File—Export—选择格式—1200dpi—点击OK保存。

杂志对格式要求很严格JPG常用。作图的时候dpi最高就对，组合的时候再按杂志要求。

对于颜色的选择……主要还是多对高分文章的积累。

彩图的画某些杂志是要收费发表的……然后黑白最实用，但是总觉得少了什么。

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    qPCR的值不仅可以做成柱状图，还可以做成点图，柱子图+点图，还可以做成热图。第五点的时候可以选择。当然数据不好啥也白搭。数据好啥图都行~

知乎言：

    直方图是大家非常熟悉的一个后期工具，但是大多数人可能都只是用它来观察一张照片的曝光分布趋势，实际上直方图可以挖掘的信息非常庞大，许多照片细节都隐藏在直方图之中，学会阅读直方图是非常重要的一课。

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学废了吧？很简单吧！

赶紧来试试吧！

(本文在大工程的qPCR章节也有详细讲解)